第一節(jié)   臨床血液學檢驗

 

血常規(guī)檢查

    【 標    本 】

    抗凝靜脈血（有些儀器也可用末梢血）。

    【 方    法 】

    血液細胞自動分析儀測定法。

    【 試    劑 】

    血液細胞自動分析儀配套試劑。

    【 操    作 】

    詳見自己實驗室血液細胞自動分析儀使用手冊。

    【 附    注 】

    1. 血常規(guī)包括白細胞計數(shù)及分類、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細胞比積、血小板計數(shù)等項目。這些項目亦有相應的手工方法，詳見有關資料。

    2. 半自動及全自動血液細胞分析儀從設計上均要求用抗凝靜脈血。其優(yōu)點為：

    （1）靜脈血能正確地反映病人實際情況，重復性好；

    （2）利于延長儀器的使用壽命；

    （3）解決了采血盤的交叉感染問題等。

    3. 血細胞計數(shù)應用EDTA·K2：為抗凝劑（EDTA·K2·2 H2O 1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。

    4. 貯血容器應選用有蓋塑料管。抗凝血采集后在室溫中貯存應不超過6h；如需制作血涂片應在2h內(nèi)完成。

    5. 測定前必須將EDTA·K2抗凝血充分混勻。

    6. 血細胞分析儀測定最適溫度為18～22℃，低于15℃或高于30℃，均可使細胞體積發(fā)生改變，影響各參數(shù)的結果。

7. 血細胞分析儀用于白細胞分類只能當作一種過篩手段，當白細胞、紅細胞、血紅蛋白和血小板的任何一項有明顯

 

升高或降低；白細胞分類出現(xiàn)異常結果（中間細胞群百分率≥8.0%）；紅細胞、白細胞和血小板的任何一個直方圖出現(xiàn)異常圖形等情況，須用顯微鏡檢查及分類。

 

嗜酸性粒細胞直接計數(shù)

    【 標    本 】

    末梢血或抗凝靜脈血。

    【 方    法 】

    直接計數(shù)法。

    【 試    劑 】

    1. Hinkelmann液；

    2. 乙醇- 伊紅稀釋液；

    3. 伊紅- 丙酮稀釋液。

    【 操    作 】

    1．小試管中加稀釋液0.38ml。

    2．常法取末梢血20ul，加入管內(nèi)混勻，待紅細胞溶解后兩側充池。

    3．靜置3～5min ，用低倍鏡（必要時用高倍鏡）鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)?？倲?shù)×20×106=嗜酸性粒細胞/L。

    【 附    注 】

    1. 血液稀釋后應于1 h 內(nèi)計數(shù)完畢。

    2. 充池前要充分混勻，但又不宜用力過猛。

    3. 住院病人采集標本時間力求統(tǒng)一，以免受日間生理變化的影響。

 

紅細胞沉降率測定

    【 標    本 】

    抗凝靜脈血。

    【 方    法 】

    魏氏法。

    【 試    劑 】

    109mmol/L枸櫞酸鈉溶液。

    【 操    作 】

    1. 3mm×100mm試管1支，在2ml容量處刻上記號，加抗凝劑0.4ml。

    2. 靜脈采血后，取下針頭，加血至刻度，旋轉混合。

    3. 用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混勻血液至" 0 " 刻度處，拭去管外附著的血液，將管垂直立在血沉架上。

    4. 記時，室溫中靜置1h，觀察血漿高度，以紅細胞下沉的毫米數(shù)報告之。

    【 附     注 】

    1. 紅細胞在單位時間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質，血漿中脂類的量和質，紅細胞的大小與數(shù)量，是否成串錢相聚以及血沉管的內(nèi)徑、清潔度、放置位置是否垂直，室溫高低等因素都有關系。

    2. 標本采集時應空腹。

    3. 血液和抗凝劑的比例要準確。

    4. 血沉管內(nèi)徑要標準（2.5mm），放置要垂直。

    5. 做血沉的標本要在采集后3h 內(nèi)測定，并充分混勻。

    6. 室溫過低、過高和貧血時，對結果有影響。為此，血沉應盡量放在18～25℃室溫下測定。室溫過高時血沉加快，可以按溫度系數(shù)校正。室溫過低時血沉減慢，無法校正。 

網(wǎng)織紅細胞計數(shù)

    【 標    本 】

    末梢血或抗凝靜脈血。

    【 方    法 】

    百分計數(shù)法。

    【 試    劑 】

    10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液或10g/L煌焦油藍ACD溶液。

    【 操    作 】

    1. 于小試管中滴加1滴煌焦油藍生理鹽水溶液或煌焦油藍ACD溶液。

    2. 加入末梢血或靜脈血2 滴于上述試管中，混勻。

    3. 靜置15～20min 后，取用1 滴制成薄片。

    4. 油鏡下檢查1000個紅細胞中網(wǎng)織紅細胞數(shù)，以百分率或絕對值報告。

    【 附    注 】

    1. 活體染色時間不能過短，室溫低時，放37℃溫箱。

    2. 網(wǎng)織紅細胞也可用Miller窺盤計數(shù)法、熒光染色或流式細胞儀計數(shù)。 

嗜堿性點彩紅細胞計數(shù)

    【 標    本 】

    末梢血。

    【 方    法 】

    百分計數(shù)法。

    【 試    劑 】

    1. 甲醇；

    2. 堿性亞甲基藍染液（保存2～3周）。

    【 操    作 】

    1. 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。

    2. 用堿性亞甲基藍染液染色1～2min，水洗待干。

    3. 用油鏡計數(shù)1000個紅細胞中嗜堿性點彩紅細胞數(shù)，以百分率報告。

    【 附    注 】

    1. 用堿性亞甲基藍染液染色后，紅細胞呈淺藍綠色，嗜堿性點彩呈深藍色。

    2. 也可用瑞氏染色，嗜堿性點彩呈藍黑色。

    3. 由于點彩紅細胞分布不勻，必要時擴大計數(shù)紅細胞數(shù)。

 

 紅斑狼瘡細胞檢查

    【 標    本 】

    靜脈血。

    【 方    法 】

    改良血塊法。

    【 操    作 】

    1. 抽取患者血液2～3ml ，注于干燥試管內(nèi)，于室溫待凝。

    2. 于凝固剛形成時，用竹簽將凝塊攪碎，并將殘余凝塊除去。

    3. 以2000r/分鐘離心沉淀10分鐘 ，使白細胞聚集在同一層面，以利于狼瘡細胞形成。

    4. 置37℃溫箱內(nèi)溫育2h。

    5. 取出白細胞層及其上下各少許，置紅細胞比積管中，以2000r/分鐘離心，沉淀10分鐘。

    6. 吸去上層液，輕輕吸取白細胞層，制成薄片3～4張。

    7. 以瑞氏染液染色、鏡檢。

    【 附    注 】

    1. 整個操作時間不能超過3h。

    2. 注意與果餡細胞鑒別。

一氧化碳血紅蛋白定性試驗

    【 標    本 】

    末梢血。

    【 試    劑 】

    50g/L  NaOH。

    【 操    作 】

    1. 取試管2支，各加蒸餾水3～5ml，一管加患者血液三滴，另一管加正常人對照血3滴，混勻。此時，如患者血中有一氧化碳，則血液呈櫻桃紅色。

    2. 每管各加50g/L  NaOH1滴，輕輕混合，正常對照管呈綠褐色，如患者血液中有一氧化碳血紅蛋白，則溶血液仍呈櫻桃紅色，為陽性；如與正常對照色澤一致為陰性。

    【 附    注 】

    1. 觀察結果須及時，否則櫻桃紅色逐漸退去，不易分辨。

    2. 本試驗敏感性較差，血液中一氧化碳含量到一定程度時才顯陽性。如患者事先已采取通氣措施，血中一氧化碳含量下降，試驗可陰性。但臨床癥狀、體征仍可能存在。