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第一節(jié) 臨床血液學(xué)檢驗(yàn)
血常規(guī)檢查
【 標(biāo) 本 】
抗凝靜脈血（有些儀器也可用末梢血）。
【 方 法 】
血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀測(cè)定法。
【 試 劑 】
血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀配套試劑。
【 操 作 】
詳見自己實(shí)驗(yàn)室血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀使用手冊(cè)。
【 附 注 】
1. 血常規(guī)包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞比積、血小板計(jì)數(shù)等項(xiàng)目。這些項(xiàng)目亦有相應(yīng)的手工方法，詳見有關(guān)資料。
2. 半自動(dòng)及全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀從設(shè)計(jì)上均要求用抗凝靜脈血。其優(yōu)點(diǎn)為：
（1）靜脈血能正確地反映病人實(shí)際情況，重復(fù)性好；
（2）利于延長(zhǎng)儀器的使用壽命；
（3）解決了采血盤的交叉感染問(wèn)題等。
3. 血細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)用EDTA·K2：為抗凝劑（EDTA·K2·2 H2O 1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。
4. 貯血容器應(yīng)選用有蓋塑料管。抗凝血采集后在室溫中貯存應(yīng)不超過(guò)6h；如需制作血涂片應(yīng)在2h內(nèi)完成。
5. 測(cè)定前必須將EDTA·K2抗凝血充分混勻。
6. 血細(xì)胞分析儀測(cè)定最適溫度為18～22℃，低于15℃或高于30℃，均可使細(xì)胞體積發(fā)生改變，影響各參數(shù)的結(jié)果。
7. 血細(xì)胞分析儀用于白細(xì)胞分類只能當(dāng)作一種過(guò)篩手段，當(dāng)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板的任何一項(xiàng)有明顯
升高或降低；白細(xì)胞分類出現(xiàn)異常結(jié)果（中間細(xì)胞群百分率≥8.0%）；紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的任何一個(gè)直方圖出現(xiàn)異常圖形等情況，須用顯微鏡檢查及分類。
嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)
【 標(biāo) 本 】
末梢血或抗凝靜脈血。
【 方 法 】
直接計(jì)數(shù)法。
【 試 劑 】
1. Hinkelmann液；
2. 乙醇- 伊紅稀釋液；
3. 伊紅- 丙酮稀釋液。
【 操 作 】
1．小試管中加稀釋液0.38ml。
2．常法取末梢血20ul，加入管內(nèi)混勻，待紅細(xì)胞溶解后兩側(cè)充池。
3．靜置3～5min ，用低倍鏡（必要時(shí)用高倍鏡）鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)?？倲?shù)×20×106=嗜酸性粒細(xì)胞/L。
【 附 注 】
1. 血液稀釋后應(yīng)于1 h 內(nèi)計(jì)數(shù)完畢。
2. 充池前要充分混勻，但又不宜用力過(guò)猛。
3. 住院病人采集標(biāo)本時(shí)間力求統(tǒng)一，以免受日間生理變化的影響。
紅細(xì)胞沉降率測(cè)定
【 標(biāo) 本 】
抗凝靜脈血。
【 方 法 】
魏氏法。
【 試 劑 】
109mmol/L枸櫞酸鈉溶液。
【 操 作 】
1. 3mm×100mm試管1支，在2ml容量處刻上記號(hào)，加抗凝劑0.4ml。
2. 靜脈采血后，取下針頭，加血至刻度，旋轉(zhuǎn)混合。
3. 用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混勻血液至" 0 " 刻度處，拭去管外附著的血液，將管垂直立在血沉架上。
4. 記時(shí)，室溫中靜置1h，觀察血漿高度，以紅細(xì)胞下沉的毫米數(shù)報(bào)告之。
【 附 注 】
1. 紅細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質(zhì)，血漿中脂類的量和質(zhì)，紅細(xì)胞的大小與數(shù)量，是否成串錢相聚以及血沉管的內(nèi)徑、清潔度、放置位置是否垂直，室溫高低等因素都有關(guān)系。
2. 標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)空腹。
3. 血液和抗凝劑的比例要準(zhǔn)確。
4. 血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn)（2.5mm），放置要垂直。
5. 做血沉的標(biāo)本要在采集后3h 內(nèi)測(cè)定，并充分混勻。
6. 室溫過(guò)低、過(guò)高和貧血時(shí)，對(duì)結(jié)果有影響。為此，血沉應(yīng)盡量放在18～25℃室溫下測(cè)定。室溫過(guò)高時(shí)血沉加快，可以按溫度系數(shù)校正。室溫過(guò)低時(shí)血沉減慢，無(wú)法校正。
網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)
【 標(biāo) 本 】
末梢血或抗凝靜脈血。
【 方 法 】
百分計(jì)數(shù)法。
【 試 劑 】
10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液或10g/L煌焦油藍(lán)ACD溶液。
【 操 作 】
1. 于小試管中滴加1滴煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液或煌焦油藍(lán)ACD溶液。
2. 加入末梢血或靜脈血2 滴于上述試管中，混勻。
3. 靜置15～20min 后，取用1 滴制成薄片。
4. 油鏡下檢查1000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，以百分率或絕對(duì)值報(bào)告。
【 附 注 】
1. 活體染色時(shí)間不能過(guò)短，室溫低時(shí)，放37℃溫箱。
2. 網(wǎng)織紅細(xì)胞也可用Miller窺盤計(jì)數(shù)法、熒光染色或流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)。
嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)
【 標(biāo) 本 】
末梢血。
【 方 法 】
百分計(jì)數(shù)法。
【 試 劑 】
1. 甲醇；
2. 堿性亞甲基藍(lán)染液（保存2～3周）。
【 操 作 】
1. 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。
2. 用堿性亞甲基藍(lán)染液染色1～2min，水洗待干。
3. 用油鏡計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞數(shù)，以百分率報(bào)告。
【 附 注 】
1. 用堿性亞甲基藍(lán)染液染色后，紅細(xì)胞呈淺藍(lán)綠色，嗜堿性點(diǎn)彩呈深藍(lán)色。
2. 也可用瑞氏染色，嗜堿性點(diǎn)彩呈藍(lán)黑色。
3. 由于點(diǎn)彩紅細(xì)胞分布不勻，必要時(shí)擴(kuò)大計(jì)數(shù)紅細(xì)胞數(shù)。
紅斑狼瘡細(xì)胞檢查
【 標(biāo) 本 】
靜脈血。
【 方 法 】
改良血塊法。
【 操 作 】
1. 抽取患者血液2～3ml ，注于干燥試管內(nèi)，于室溫待凝。
2. 于凝固剛形成時(shí)，用竹簽將凝塊攪碎，并將殘余凝塊除去。
3. 以2000r/分鐘離心沉淀10分鐘 ，使白細(xì)胞聚集在同一層面，以利于狼瘡細(xì)胞形成。
4. 置37℃溫箱內(nèi)溫育2h。
5. 取出白細(xì)胞層及其上下各少許，置紅細(xì)胞比積管中，以2000r/分鐘離心，沉淀10分鐘。
6. 吸去上層液，輕輕吸取白細(xì)胞層，制成薄片3～4張。
7. 以瑞氏染液染色、鏡檢。
【 附 注 】
1. 整個(gè)操作時(shí)間不能超過(guò)3h。
2. 注意與果餡細(xì)胞鑒別。
一氧化碳血紅蛋白定性試驗(yàn)
【 標(biāo) 本 】
末梢血。
【 試 劑 】
50g/L NaOH。
【 操 作 】
1. 取試管2支，各加蒸餾水3～5ml，一管加患者血液三滴，另一管加正常人對(duì)照血3滴，混勻。此時(shí)，如患者血中有一氧化碳，則血液呈櫻桃紅色。
2. 每管各加50g/L NaOH1滴，輕輕混合，正常對(duì)照管呈綠褐色，如患者血液中有一氧化碳血紅蛋白，則溶血液仍呈櫻桃紅色，為陽(yáng)性；如與正常對(duì)照色澤一致為陰性。
【 附 注 】
1. 觀察結(jié)果須及時(shí)，否則櫻桃紅色逐漸退去，不易分辨。
2. 本試驗(yàn)敏感性較差，血液中一氧化碳含量到一定程度時(shí)才顯陽(yáng)性。如患者事先已采取通氣措施，血中一氧化碳含量下降，試驗(yàn)可陰性。但臨床癥狀、體征仍可能存在。
